کلونینگ و امکان سنجی بیان ژن فیتاز از باکتری باسیلوس سابتیلیس

فیتات منبع عمده تأمین فسفر در جیره حیوانات مزرعه ای می باشد. این ترکیب دسترسی زیستی به مواد معدنی، پروتئین ها و کربوهیدرات ها را کاهش می دهد. آنزیم فیتاز با تجزیه فیتات، باعث کاهش اثر ضد تغذیه ای آن می شود. میکروارگانیسم ها بهترین منبع تولید تجاری این آنزیم محسوب می شوند. فیتاز تولید شده توسط باسیلوس سابتیلیس برای استفاده در صنعت مناسب می باشد. در این مطالعه به منظور همسانه سازی و بررسی امکان تولید فیتاز نوترکیب، ژن فیتاز با استفاده از آغازگرهای لینکردار طراحی شده از باکتری باسیلوس سابتیلیس ptcc 1156، جداسازی شد. پس از انجام واکنش pcr، ژن فیتاز با روش همسانه سازی ta در وکتور ptz57r/t کلون شد و جهت تأیید صحت، مورد توالی یابی قرار گرفت. نتایج توالی یابی صحت انجام همسانه سازی را نشان داد. توالی به دست آمده پس از ویرایش با شماره دسترسی jn886002 در ncbi ثبت شد. به منظور استخراج ژن فیتاز و همسانه سازی در وکتور بیان pet-32a(+)، پلاسمید نوترکیب و وکتور با آنزیم های برشی (bamhi و hindiii) مورد هضم قرار گرفتند. در نهایت، پس از انجام واکنش اتصال، پلاسمید حاصل به باکتری اشرشیاکلی bl21(de3) منتقل و ساختاری حاصل شد که ممکن است پس از القای بیان با القاگر مناسب قادر به تولید آنزیم فیتاز نوترکیب باشد.